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酶標儀基本知識及其檢測原理
更新時間:2024-03-28 點擊次數:965

酶標儀基本知識及其檢測原理

酶標儀(yi) 有單波長和雙波長檢測功能有時使用者不知在什麽(me) 情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長"就是使用一種對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定;而“雙波長"則除了用對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定外,同時用對特異顯色不敏感的波長如630 nm進行測定,酶標儀(yi) 最後打印出來的吸光度則為(wei) 二者之差。630 nm波長下得到的吸光度是非特異的,來自於(yu) 板子上諸如指紋、灰塵、髒物等所致的吸收。因此,在ELISA比色測定中,最好使用雙波長,且不必設空白孔。

二、測定的吸光度範圍   

通常,酶標儀(yi) 的吸光度測定範圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀(yi) 可測定的吸光度一般在0-2.5之間,但現在基本上都做了拓寬,可達到3.5以上,並且能保持很好的精密度與(yu) 線性。如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2的吸光度測定範圍為(wei) 0-3.5,而Multiskan Ascent的吸光度測定範圍(Abs)達0-4.0,在0-4.0範圍,線性誤差不超過±2.0%,在0.3-3.0吸光度範圍內(nei) ,測定精密度CV小於(yu) ±0.2%;3.0-4.0 Abs範圍內(nei) ,測定精密度CV小於(yu) 士0.2%。因此,對於(yu) 酶標儀(yi) 的吸光度範圍不必去刻意追求大的吸光度範圍,主要要看在一定的吸光度範圍內(nei) 的線性和精密度如何。

三、光學係統   

酶標儀(yi) 的光學係統采用的是垂直光路多通道(通常為(wei) 8或12通道,亦有單通道)檢測,一般為(wei) 矽光管或光導纖維,除測定通道外,有的酶標儀(yi) 還有一個(ge) 參比通道,每次測定可進行自我校準。酶標儀(yi) 的光學係統功能如何,均可通過酶標儀(yi) 測定的吸光度範圍、線性度、精密度和準確度等體(ti) 現出來。光學係統好的話,則上述指標也應較佳。測定的精密度與(yu) 測定通道之間的均一性有直接關(guan) 係。單通道可避免因通道不同所致的差異。

四、檢測速度   

酶標儀(yi) 的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。檢測速度快,有利於(yu) 提高檢測的精密度,即避免由於(yu) 測定過程中,因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場上常見的酶標儀(yi) 檢測速度都非常快,通常在數秒鍾內(nei) ,如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2和MK-3檢測96孔隻需2s(連續模式)或5s(步進模式)。Multiskan Ascent為(wei) 單通道檢測,亦隻需9s(連續模式)或14s(步進模式)。又如BioRad公司的Benchmark的檢測速度單波長為(wei) 7s,雙波長為(wei) 15s。

五、震板功能   

酶標儀(yi) 的震板功能是指酶標儀(yi) 在對ELISA板孔進行比色測定前對其進行振蕩混勻,使板孔內(nei) 顏色均一。目前市場上常見的酶標儀(yi) 均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋轉等方式及振蕩幅度等任意調節,如Labsystems的MK-2;有的則較為(wei) 固定,如BioRad 550。使用有震板功能的酶標儀(yi) ,在進行ELISA測定顯色反應完成加入終止劑後,可不必振蕩混勻,直接放人酶標儀(yi) 上測定即可。

六、溫育功能   

溫育功能是指酶標儀(yi) 本身能按要求自動精確地控製儀(yi) 器內(nei) 部的溫度,使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀(yi) 器內(nei) 部完成,而無需再外配溫箱。目前,隻有少部分酶標儀(yi) 具有此種功能,如Labsystems公司的Multiskan Ascent,BioRad公司的Benchmark和Biotek公司的ElxS08等。溫育功能隻是酶標儀(yi) 的一個(ge) 附加功能,是否具有並不能說明酶標儀(yi) 檔次的高低及儀(yi) 器的優(you) 劣。作為(wei) 實驗室是否選擇,則可根據自己實驗室的條件及需要來決(jue) 定。

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